دانلود پایان نامه ارشد: اصلاح الکترود خمیرکربن با نانو ذرات SiO2 و کاربرد آن به عنوان زیست حسگر الکتروشیمیایی
تشخیصDNA ، یکی از حوزههای مهم بیولوژی مولکولی و مطالعات زیست فناوری است. تشخیص توالی بازهای خاص در نوکلئیک اسیدهای انسانی، ویروسی و باکتریایی از اهمیت بسزایی در حوزههای متعدد برخوردار است که دارای کاربرد در تشخیص: عوامل بیماری، ارگانیسمهای آلوده کننده غذایی، تحقیقات زیست محیطی و علوم جنایی میباشد. از زمانیکه پالیکیک، فعالیت الکتروشیمیایی نوکلئیک اسیدها را کشف کرد [1]، زیست حسگرها امیدهای تازهای برای ایجاد روشهای سریع، ارزان و ساده برای تشخیص نوکلئیک اسیدها فراهم ساختهاند [2]. تشخیص یا آشکارسازی الکتروشیمیایی گونههای زیستی براساس واکنشهای الکتروشیمیایی است که در طول فرآیندهای تشخیص زیستی اتفاق میافتد [3] .به علت اینکه واکنشهای الکتروشیمیایی مستقیماً یک علامت الکترونیکی ایجاد میکنند، نیازی به دستگاههای گرانقیمت تبدیل علامت وجود ندارد. علاوه بر این، به علت اینکه کاوشگر میتواند براحتی بر روی الکترودها تثبیت شود، تشخیص آن میتواند توسط آنالیز الکتروشیمیایی ارزانقیمت انجام شود. همچنین سیستمهای قابل حمل برای آزمایشات کلینیکی و تحقیقات زیست محیطی توسعه یافته است [4]. ابزارهای الکتروشیمیایی، بسیار حساس، ساده و سریع بوده و براحتی به کار برده میشوند و با فناوریهای نانو سازگاری دارند. بنابراین به نظر میرسد، نامزدهای خوبی برای تشخیص سریع و ارزانقیمت بیماریهای ژنی و تشخیص گونه های بیولوژیکی پاتوژنی میباشند.
یکی از بزرگترین چالشها در قلمرو الکتروشیمی تجزیهای، طراحی و ساخت الکترودهایی میباشد که در حالت ایدهآل بتوانند به یک گونهی شیمیایی خاص به صورت کاملاً گزینشپذیر و با حساسیت بالا پاسخ دهند. زیست حسگرهای الکتروشیمیایی، دسته وسیعی از الکترودهای اصلاح شده میباشند که امروزه بسیار مورد توجه محققین قرار گرفتهاند [5]. زیست حسگر، ابزاری است که از یک لایه فعال بیولوژیکی به عنوان جزء شناساگر استفاده میکند تا عوامل فیزیکی برهمکنش بیولوژیکی را به علامت قابل اندازهگیری تجزیهای تبدیل کند [6]. دو عامل در طراحی یک زیست حسگر مناسب نقش ایفا میکنند: الف) روش مناسب تثبیت پذیرنده زیستی در سطح مبدل که موجب افزایش طول عمر، حساسیت و پایداری آن میگردد. ب) انتخاب مبدل مناسب. انواع متداول مبدلهای مورد استفاده در زیست حسگرها، شامل مبدلهای: الکتروشیمیایی [3]، نوری (نورتابی، جذب و رزونانس پلاسمون سطح ) [9]، حساس به تغییر جرم [10] و حرارت می باشند [11]. زیست حسگرها خصوصیات و مزایای خوبی، نظیر: آسانی استفاده، سرعت تشخیص مناسب، حساسیت بالا و هزینه کمتر نسبت به روشهای طیف سنجی وکروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا را دارا میباشند که قادرند گونه آزمایشی مورد نظر را در غلظتهای بسیار کم در نمونههای بیولوژیکی اندازهگیری کنند [14-12]. در حقیقت زیست حسگرها، میتوانند با بهرهگیری از هوشمندی مواد
بیولوژیك، تركیب یا تركیباتی را شناسایی نمایند که با آنها واكنش داده و بدین ترتیب یک پیام شیمیایی، نوری و یا الكتریكی تولید کنند. اساس کار یک زیست حسگر تبدیل پاسخ بیولوژیکی به یک پیام قابل اندازهگیری است [15]. بطور کلی هر زیست حسگر شامل، اجزای: گونه آزمایشی مورد نظر، لایه زیستی، مبدل، پردازشگر و نمایشگر است. انواع پذیرندههای زیستی که در زیست حسگرها مورد استفاده قرار میگیرند، شامل: آنزیم، آنتی بادی، گیرندههای سلولی، اسیدهای نوکلئیک DNA یا RNA، میکروارگانیسم یا سلول کامل، بافت و غیره هستند [16].
یک زیست حسگر DNA، وسیلهای است که عامل تشخیص بیولوژیکی آن، کاوشگر DNA است. کاوشگرهای DNA، الیگونوکلئوتیدهای کوتاه تک رشتهای (ss-DNA) هستند که معمولاً کاوشگر نامیده میشوند. دئوکسی ریبونوکلئیک اسید (DNA)، یک مولکول رمزگذار دستورالعملهای ژنتیکی است که در تمام موجودات زنده، شناخته شده میباشد. درشت مولکولDNA ، یک ساختار مارپیچی شبیه نردبان دارد که گروههای فسفات و قند به طور یک در میان، نردههای نردبان و بازهای آدنین، گوانین، سیتوزین و تیمین پلههای آن را تشکیل میدهند که این بازها، دو به دو با یکدیگر توانایی تشکیل پیوند هیدروژنی قوی را دارند. DNA به خاطر حضورگروههای فسفات در ساختار آن، دارای بار منفی میباشد و از این رو خاصیت پلی آنیونی را دارد، به طوری كه بازهای آلی به سمت داخل و گروه فسفات به سمت بیرون یا در سطح خارجی درشت مولکول DNAقرار میگیرند. در DNA، هر رشته از نوکلئوبازها تنها با یک نوع رشته دیگر از نوکلئوبازها جفت میشوند که به آن جفت شدن بازهای مکمل میگویند. در ساختار دو رشتهایDNA ، باز آدنین در مقابل تیمین با دو پیوند هیدروژنی و گوانین در مقابل سیتوزین با سه پیوند هیدروژنی قرار دارد. پس یک توالی خاص از DNA قادر است تنها به توالی مکمل خود پیوند شود [17]. در سالهای اخیر، تلاشهای زیادی برای طراحی زیست حسگرهای الکتروشیمیایی با صحت، حساسیت و انتخاب پذیری تقویت شده، انجام شده است [18]. نانوذرات میتوانند در این زمینه بسیار مفید باشند و در طراحی زیست حسگرهای الکتروشیمیایی که نسبت به سایر زیست حسگرها کارائی بالاتری دارند، به طور عمده ای استفاده شوند [19].
نانوذرات به عنوان یکی از مهمترین ساختارها در حوزه فناوری نانو، با توجه به اندازه کوچک آنها، خواص فیزیکی، شیمیایی و الکترونیکی منحصر به فردی را نشان میدهند که در تهیه زیست حسگرها، بسیار مورد توجه میباشند [20]. ویژگیهای یک ماده میتواند به طور معنی داری با اندازه ذرات آن تغییر کند. بسیاری از خواص ماده، از جمله: ویژگیهای ساختاری، گرمایی، شیمیایی، مکانیکی، مغناطیسی و نوری در اثر کاهش اندازه ذره تغییر میکند. در نتیجه، با استفاده از این مواد در ساخت نانوزیست حسگرها، میتوان خواص جدید و مختلفی ایجاد نمود که از آنها، بتوان برای مطالعه بهتر سیستمهای متفاوت استفاده کرد. از میان نانوزیست حسگرها، نانوزیست حسگرهای الکتروشیمیایی رشد خوبی داشته است ]21 [.
نانوزیست فناوری DNA، فناوری بالقوهای است که از تلفیق زیست فناوری و فناوری نانو بوجود آمده است. نانوزیست فناوری DNA، از ساختار و خواص مولکول DNA جهت استفاده در زمینه زیستی، مهندسی و پزشکی بهره میبرد. هدف اساسی نانوزیست فناوری DNA، ساخت مواد با ساختار تکرار شونده، وسایل و ماشینهایی در ابعاد نانو، توسعهی این ساختارها به سطوح بزرگتر (ماکروسکوپی) با استفاده از خواص ساختاری و عملکردی و برهمکنشهای بین مولکولی DNA است. در این زمینه، یکی از مواردی که بسیار مورد توجه محققین قرار گرفته است، مطالعه و بررسی در مورد ساختار DNA و چگونگی عملکرد آن در شرایط محیطی متفاوت و برهمکنشهای آن با ترکیبات مختلف بوده است [22]. همانطور که میدانیم مولکول DNA یک ماده ژنتیکی است که حامل اطلاعات ژنتیکی در تمام موجودات زنده میباشد. مولکول DNA، دارای توالی خاصی ناشی از چگونگی آرایش بازهای تشکیلدهندهی آن میباشد که این توالی سبب ایجاد خواص خاصی در هر رشته DNA میگردد. توالی DNA جهت پردازش اطلاعات مفید بوده و سبب میگردد که ساختار آن به صورت پایا و محکم درآید. علاوه بر این، DNA دارای خواص منحصر به فردی مانند دارا بودن ساختار هندسی در ابعاد نانو، ذخیره و کد کردن اطلاعات، خودتکثیری، خودتشخیصی ساختار و خودآرایی است [23]. امروزه، محققین تعداد زیادی از نانوزیست حسگر DNA ساختهاند که از آنها در جهت مطالعه برهمکنش DNA با سایر ترکیبات از جمله: داروها، پروتئینها و ترکیبات شیمیایی مختلفی استفاده شده است ]25،24[.
همچنین نانو مواد ، انتقال الکترون بین زیست مولکولهای تثبیت شده و سطح الکترود را آسان میکنند. نانوذرات برای تثبیت مولکولهای زیستی، کاتالیز واکنشهای الکتروشیمیایی، افزایش سرعت انتقال الکترون بین سطح الکترود و پروتئین، نشان دار کردن مولکولهای زیستی و حتی به عنوان واکنشگر عمل میکنند [26]. با توجه به بزرگی سطح مؤثر و بالا بودن سطح انرژی، نانوذرات بیومولکولها را بشدت جذب کرده و برای تثبیت مولکولهای زیستی در ساخت زیست حسگر بکار میروند . انواع زیادی از نانوذرات، مانند: نانوذرات اکسیدی (مثلاً 2SiO) برای ساخت حسگرهای الکتروشیمیایی و زیست حسگرها به کار گرفته شدهاند [29]. این نانوذرات برای تثبیت مولکولهای زیستی به دلیل سازگاری خوب و آماده سازی آسان، استفاده شدهاند .
DNA تلومری انسان، از تکرارهای پشت سرهم بازهای تیمین، آدنین، گوانین و سیتوزین، CCCTAA)/(TTAGGG تشکیل شده است [32]. تلومرها دارای ساختار خاصی هستند که موجب استحکام و پایداری مولکول خطی DNA میشوند و انتهای كرموزوم را از تجزیه شدن، نوآرایی و الحاق انتهایی حفظ میكنند. در هر تقسیم سلولی به شكل پیوسته، بخشی از طول تلومر كوتاه میشود. كوتاه شدن پیوسته تلومر به جدا شدن یك سری از پروتئینها از ساختار تلومر و تغییر بیان ژن منجر میشود. كوتاه شدن مداوم تلومر به توقف چرخه سلولی و مرگ سلولی میانجامد [35-33]. تلومراز آنزیمی است كه بدون نیاز به الگو، موجب سنتز تلومر میشود. این سلولها به كمك آنزیم تلومراز، كوتاه شدن تلومر را كه در پی تقسیمهای متوالی روی میدهد، جبران میکنند [36]. با این حال، آنزیم تلومراز، در حدود 90 درصد از سلولهای سرطانی، سطح بالایی از فعالیت را دارد و همین فعالیت بالا منجر به ایجاد سرطان میگردد . چنانچه اتصال تلومرازها به نواحی تلومری توسط برهمکنش مولکولهای کوچک با نواحی تلومری مهار شود، به شکل مستقیم فعالیت تلومراز کاهش مییابد.
از طرف دیگر، در رشتههای DNAی غنی از باز سیتوزین C، ساختارهایی می تواند شکل بگیرد که در آن، هر C از طریق پیوند هیدروژنی با سه C دیگر در ارتباط باشد، به شرط آنکه Cی مقابل آن به صورت همی پروتونه باشد، یعنی جفت باز C-C+ شکل بگیرد، به چنین ساختاری، ساختار i-motif میگویند و در شرایطی تشکیل میشود که رشته DNA غنی از باز سیتوزین باشد . ترکیباتی که با توالی های ذکر شده بر همکنش بدهند، قادر به مهارکردن فعالیت تلومراز میباشند. پایداری ساختارi-motif به تکرار توالی دارای سیتوزین، pH اسیدی ملایم، ماهیت و غلظت کاتیونهای موجود در محلول بستگی دارد. پایداری ساختار i-motif پیچ خورده در pH اسیدی ملایم، یک استراتژی خوب برای درمان سرطان است، چون می تواند از واکنش تلومراز در سلول سرطانی جلوگیری میکند [41].
[1] Palecek
[2] Probe
[3] Biosensors
Luminescence
[5] Surface plasmon resonance
3 Deoxyribonucleic acid
4 Ribonucleic acid
5 Macromolecule
[9] Accuracy
2 Sensivity
3 Selectivity
4 Nanoparticles
[13] Nanometer scale structural geometry
[14] Information encodin
[15] Self-replicating
[16] Self-recognition of structure
[17] Self-assembly
[18] Nanomaterial
[19] Tamoxifen citrate
[20] Circular dichroism
[21] Working electrode
[22] Carbon paste electrodes
نسخه قابل چاپ | ورود نوشته شده توسط نجفی زهرا در 1399/10/26 ساعت 04:29:00 ب.ظ . دنبال کردن نظرات این نوشته از طریق RSS 2.0. |